Question

Difficulty: EasyProtein Ayrıştırma ve Analiz Teknikleri

Protein saflaştırma ve analiz tekniklerinden biri olan; proteinlerin bir elektrik alanı altında, jel ortamında oluşturulmuş bir pHpH gradyanı boyunca hareket ederek net yüklerinin sıfır olduğu pHpH değerinde durmaları ve dar bantlar halinde toplanmaları prensibine dayanan yöntem aşağıdakilerden hangisidir?

  1. İzoelektrik odaklamaAnswer
  2. B
    SDS-PAGE
  3. C
    Afinite kromatografisi
  4. D
    İyon değişim kromatografisi

Answer

Proteinlerin bir pH gradyanı altında net yüklerinin sıfır olduğu (pI) noktada odaklanmalarını sağlayan teknik izoelektrik odaklamadır.
Doğru cevap olan izoelektrik odaklama tekniğinde, özel amfolitler yardımıyla jelde bir pH gradyanı oluşturulur. Proteinler bu gradyan üzerinde elektrik alan etkisiyle hareket ederken, net yüklerinin sıfır olduğu pH değerine (pI) ulaştıklarında üzerlerindeki kuvvet kalkar ve o noktada dar bir bant halinde toplanırlar (odaklanırlar).

Step-by-Step Solution

1
Proteinin net yükü ile pH arasındaki ilişkiyi belirle.
Proteinler amfoterik moleküllerdir; ortam pH'sı pI değerinden düşükse pozitif, yüksekse negatif yüklüdürler.
Elektriksel alanda göç yönünü belirlemek için proteinin yük durumunu bilmek gerekir.
2
Yöntemdeki pH gradyanı ve elektrik alan etkisini analiz et.
Jel üzerinde düşük pH'dan (anot tarafı) yüksek pH'ya (katot tarafı) doğru bir gradyan vardır.
Proteinin yükünün hareket ettikçe değişmesini sağlamak için gradyan gereklidir.
3
Proteinin durma noktasını tespit et.
Protein, net yükünün sıfır olduğu pH değerine (pI) ulaştığında elektriksel alandan etkilenmez ve orada durur.
Elektriksel kuvvetin (F=qE) sıfır olması için net yükün (q) sıfır olması gerekir.

Key Concept

İzoelektrik nokta (pI), bir proteinin net elektriksel yükünün sıfır olduğu pH değeridir ve izoelektrik odaklama tekniği bu prensibi kullanarak yüksek çözünürlüklü ayrım sağlar.

Hints

1
Soruda geçen 'net yükün sıfır olduğu nokta' ifadesi size hangi biyokimyasal terimi hatırlatıyor?
2
İzoelektrik nokta (pI) kavramı ile yöntemin adındaki benzerliğe dikkat edin.

Practice More

İzoelektrik odaklama ile SDS-PAGE'in birleştirilmesiyle yapılan 2-boyutlu (2D) elektroforez yöntemini inceleyebilirsiniz.
Estimated Time:45s
Rate this question