Examkin

Question

Difficulty: MediumProtein Ayrıştırma ve Analiz Teknikleri

Proteinlerin moleküler ağırlıklarını saptamak amacıyla laboratuvarlarda yaygın olarak kullanılan **SDS−PAGESDS-PAGE (Sodyum Dodesil Sülfat - Poliakrilamid Jel Elektroforezi) tekniği ve bu yöntemde kullanılan reaktiflerin işlevleri ile ilgili aşağıdaki ifadelerden hangisi yanlıştır**?

  1. A
    SDSSDS, proteinlerin üç boyutlu yapılarını bozarak onları denatüre eder ve proteinlere kütleleriyle orantılı, homojen bir negatif yük kazandırır.
  2. B
    β\beta-merkaptoetanol veya ditiyotreitol (DTTDTT), polipeptid zincirleri arasındaki kovalent disülfid bağlarını indirgeyerek multimerik proteinlerin alt birimlerine ayrılmasını sağlar.
  3. Elektroforez sırasında proteinlerin jeldeki göç hızı, proteinin izoelektrik noktası (pIpI) ile ortam pHpH'ı arasındaki farka bağlıdır.Answer
  4. D
    Bromfenol mavisi, elektroforezin ilerleyişini takip etmek amacıyla kullanılan ve proteinlerden daha hızlı hareket eden bir izleme (tracking) boyasıdır.
  5. E
    Poliakrilamid jeli, proteinlerin büyüklüklerine göre süzüldüğü bir matris oluşturur; jel konsantrasyonu arttıkça gözenek büyüklüğü azalır.

Answer

Elektroforez sırasında proteinlerin göç hızının izoelektrik nokta ve pH farkına bağlı olduğunu belirten ifade yanlıştır; çünkü SDS−PAGESDS-PAGE yönteminde ayrım sadece moleküler ağırlığa dayanır.
SDS−PAGESDS-PAGE tekniğinde, proteinler güçlü bir anyonik deterjan olan SDSSDS ile muamele edilir. SDSSDS, proteinlerin doğal yüklerini örterek onlara kütleleri ile orantılı sabit bir negatif yük/kütle oranı kazandırır. Bu sayede, elektrik alanı altındaki göç hızı proteinin orijinal yükünden veya izoelektrik noktasından bağımsız hale gelir ve sadece poliakrilamid jel matrisindeki elek etkisine (moleküler ağırlığa) bağlı olur. Proteinlerin pIpI değerlerine göre ayrılması ise İzoelektrik Odaklama yöntemine özgü bir özelliktir.

Step-by-Step Solution

1
SDS−PAGESDS-PAGE yönteminin temel ayrım prensibini belirleyin.
SDS−PAGESDS-PAGE, proteinleri moleküler ağırlıklarına (boyutlarına) göre ayırır.
SDSSDS kullanımı, proteinlerin doğal yüklerini maskeler ve her proteine kütlesiyle orantılı negatif yük kazandırır.
2
Kullanılan yardımcı maddelerin işlevlerini gözden geçirin.
β\beta-merkaptoetanol disülfid bağlarını koparır, bromfenol mavisi süreci izlemeyi sağlar, poliakrilamid ise moleküler elek görevi görür.
Bu bileşenler, proteinlerin denatüre formda ve sadece boyutlarına göre süzülmesini sağlamak için gereklidir.
3
Yanlış olan seçeneği, diğer ayırma tekniklerinin prensipleriyle karşılaştırarak saptayın.
Net yük farkına (pIpI) göre ayrım SDS−PAGESDS-PAGE için değil, İzoelektrik Odaklama (IEFIEF) için geçerlidir.
SDSSDS varlığında proteinin kendi pIpI değerinin göç hızı üzerinde bir etkisi kalmaz.

Key Concept

SDS−PAGESDS-PAGE Ayrım Mekanizması ve Reaktif İşlevleri
Estimated Time:1m 30s
Rate this question

Topics

Protein Ayrıştırma ve Analiz Teknikleri

More questions from this topic